上泉伊势守在京都立坛授徒,是从永禄元年至五年这五年间,是应当时的将军足利义辉的邀请去的。藏人佐在伊势守门下修业,是从十九岁开始。那时,宫本武藏尚未出世,后来被武藏所杀的将军家武术指导吉冈兄弟,也未崭露头角。时代进入战国,成了群雄割据的局面,但足利将军家在京都仍能保持着权势。
最后那一年,永禄五年三月十日,将军义辉替伊势守饯行,设筵将军府中。宴会之中,在府中的振武殿里举行伊势守高足的分组比试,最后并由伊势守亲自登台,做新阴流的示范表演。其时被指定的对手,便是丸目藏人佐。
这一指定,是至高的荣誉,等于是由伊势守本人指定了他是门下第一人了。事后将军义辉颁发奖状,誉上泉兵法为“古今无比,堪称天下第一”,且称伊势守的刀法为“天下之瑰宝”。这张奖状,一直保藏于丸目家,且记载于藏人佐的传记之中。
这年六七月间,伊势守离开京都,遄返故乡上野国。丸目藏人佐也回球磨,出仕相良家。他在那里的职务,是指导藩下子弟的武艺,兼理肃清间谍。
那时的相良家是肥后的雄藩,有很多各藩的间谍潜入境内,侦伺藩下动态和机密。据藏人佐的传记所载,当时经他斩杀的间谍,共有十七名之多。
这期间,相良与岛津之间屡启战端,藏人佐也曾从军上阵,屡建殊功。但年壮气盛的藏人佐并不以此为满足,抱着以兵法家称雄全国的野心,遂于永禄九年,率领门人木野九郎右卫门、丸目吉卫门等,辞了相良家再度上京去了。